来源：期刊VIP网 时间：
作者：于颍颖;周浩然;赵明月;董静仪;陈静贤;张艳芳;潘孝明;
单位：鲁东大学食品工程学院;
摘要：核酸扩增检测具有较高的灵敏度与特异性，被广泛应用于包括食源性致病菌检测在内的多个领域，但当样品中目标DNA丰度极低时现有核酸检测方法可能出现假阳性或假阴性结果。为实现水产品中4种致病菌(副溶血弧菌、沙门氏菌、致病性大肠埃希氏菌、创伤弧菌)的高灵敏度、高特异性检测，该研究应用一种新型的预扩增聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)法对大量背景核酸中极微量目标DNA同时进行预扩增，使其在样品中的丰度极大提高，进而结合环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)实现对其高灵敏度、高特异性检测。结果表明，该方法可实现600 ng背景核酸中低至10拷贝的4种目标致病菌得到有效检出(丰度<10~(–9))，检测灵敏度高于普通LAMP法10～100倍。预扩增PCR通过使用一条外源通用引物可保证多个目标同时得到均衡、高效的扩增，避免多对引物间竞争抑制导致的扩增失败，因此尤其适合于复杂食品样品中多个极低丰度目标的检测，在高通量致病菌检测领域具有一定的应用前景。
关键词：致病菌检测;;高灵敏度;;预扩增聚合酶链式反应法;;环介导等温扩增
基金资助：烟台市科技创新发展计划项目(2022XDRH011)
