来源：期刊VIP网 时间：
作者：刘芝荣;张英华;
单位：黑龙江省绿色食品科学研究院;东北农业大学乳品科学教育部重点实验室;东北农业大学食品学院;
摘要：为解决巴氏奶货架期短与致病菌传统检测方法耗时长相矛盾问题，建立一种检测巴氏奶中的阪崎克罗诺杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌的鲁棒性多重聚合酶链式反应(multiple polymerase chain reaction,mPCR)方法。旨在常规mPCR的基础上深入研究，提高方法的准确性和稳定性。首先，针对每个目标菌株选择两种基因，并设计两组特异性引物，建立两套mPCR扩增体系，进行双重检测；然后，在不改变方法灵敏度的前提下，对优化了的退火温度进行范围稳定性选择；最后，将提出方法与国标方法 GB 4789.40-2016、GB 4789.38-2012、GB 4789.4-2016进行比较，同时检测人工污染样品并评价应用效果。结果表明，第一套mPCR检测巴氏奶中三种致病菌可在退火温度59～59.5℃(温差0.5℃)的范围内，具有较好的检测准确性和稳定性，灵敏度为10 CFU/mL。第二套mPCR检测巴氏奶中三种致病菌可在退火温度57.5～58.5℃(温差1℃)的范围内，不影响方法的准确性和稳定性，灵敏度为10 CFU/mL。采用建立的鲁棒性mPCR方法对人工污染的50份巴氏奶样品进行检测，检测结果与国标方法一致。在检测时效上需要4 h，较国标方法(检测时间为62～148 h)显著(P<0.05)缩短检测时间。该方法对微生物流行病学调查和研究，尤其是对巴氏奶中致病菌的快速检测和安全控制具有一定的实际应用价值。
关键词：检测;;多重聚合酶链式反应(mPCR);;巴氏奶;;致病菌;;鲁棒性
基金资助：内蒙古自治区重点项目（2021-国家乳创中心-12）;; 黑龙江省“百千万”工程科技重大专项（2020ZX07B01-2-2）
