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作者：张会;李柱;马佳欣;樊俊博;邵志伟;姜毓君;李杰;
单位：东北农业大学生命科学学院;
摘要：为获得更高表达量和优良酶学性质的甘露聚糖酶，本研究采用同源重组定点整合技术构建甘露聚糖酶黑曲霉重组菌株，并对其表达特性及酶学性质进行分析。本研究成功获得了在glaA位点发生同源重组的甘露聚糖酶黑曲霉纯合转化子MG，以及同时在asAA位点过表达内质网辅助分子伴侣DnaJ1基因的甘露聚糖酶黑曲霉纯合转化子MD。菌株MG和MD在约37 kDa处均显现出明显的甘露聚糖酶Man蛋白条带，其最高酶活力分别为6909.861 U·mL~(-1)和7890.083 U·mL~(-1)，其菌落大小略小于野生型菌株TH-2（ΔasAA::pyrG）。菌株MG和MD添加1%CPPs后的最高甘露聚糖酶酶活力分别提高了1.07倍和1.14倍，并且菌落大小明显增加。菌株MD中的甘露聚糖酶man基因转录水平是MG的1.01倍。此外，MD中内质网UPR指示基因hacA和bipA的转录水平均高于MG。重组甘露聚糖酶Man的最适温度为70℃、最适pH为4.5，且对金属离子及化学试剂表现出较高耐受性。通过过表达DnaJ1基因及添加1%CPPs可以有效提高甘露聚糖酶Man的表达量。本研究对开发和筛选酶学性质更优、产量更高的甘露聚糖酶具有重要意义。
关键词：甘露聚糖酶;;黑曲霉;;DnaJ1;;CPPs;;酶学性质
基金资助：中国博士后科学基金（2019M651149）
