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作者：李婷婷;邱毓;李欣;陈红兵;
单位：南昌大学食品科学与资源挖掘全国重点实验室;南昌大学食品学院;南昌大学江西省食物过敏重点实验室;南昌大学中德联合研究院;
摘要：目的：利用废弃猪笼液中的蛋白酶来消减牛乳主要致敏原蛋白的致敏性。方法：首先采集了米兰达猪笼草（Nepenthes×Miranda）的猪笼液，经过滤、5 kDa膜超滤、真空冷冻干燥和复溶获得酶活为126.276 U/mL的猪笼液蛋白酶液。然后用此酶对牛乳蛋白进行酶解，通过液相色谱-二级质谱法（LC-MS/MS）鉴定酶解后肽段产物，对比致敏原表位数据库以判断蛋白酶对表位的酶切情况。结果：牛乳主要致敏原蛋白中P1位的K、V、F、R、Y、I、S和L以及P1’位的D、A、V、I、L、F、E、R、Y、N、T、Q、S、W和P的肽键被有效酶解，酶切位点位于相对应的表位内，且位于蛋白表面和内部的表位均有被酶解。其中，来自α-LA的表位E_(α-LA)1中的K-V以及表位E_(α-LA)2中的K-V和K-A被酶解频率较高，来自β-LG的被酶解频率高的表位处的肽键为E_(β-LG)1和E_(β-LG)2中的L-D、V-Y和Y-V，来自αs1-CN的表位E_(αs1-CN)1中大部分的R-F和F-F被高频酶解，来自α_(s2-CN)的表位E_(αs2-CN)1中的L-N、R-Y、K-F和K-T和表位E_(αs2-CN)2中的K-T、K-L和K-I被酶解频率较高，β-CN中被酶解频率较高的表位为E_(β-CN)1和E_(β-CN)2中的L-Q、S-W、D-V、L-T、T-D和E-N。结论：猪笼液蛋白酶水解对牛乳蛋白致敏原蛋白表位表现出不同程度的破坏作用，猪笼液有望成为新型蛋白酶开发的资源，实现农业废弃物再利用。
关键词：猪笼草;;猪笼液蛋白酶;;牛乳蛋白;;致敏性;;表位破坏
基金资助：南昌大学食品科学与资源挖掘全国重点实验室开放基金（SKLF-KF-202205）
