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作者：是一林;刘威;吴昊东;王亮;
单位：江苏大学食品与生物工程学院;
摘要：天然牛乳铁蛋白肽（Bovine Lactoferricin,LfcinB）产量低、化学合成成本昂贵，因此利用基因工程制备LfcinB，成为获取牛乳铁蛋白肽的首选方法。本研究利用生物信息学方法分析融合蛋白的基本理化性质，将阴离子肽牛蛙皮肤抗氧化肽（Antioxidant Peptide from Bullfrog Skin Protein,APBSP）与LfcinB连接起来，以融合蛋白的方式进行表达，中和牛乳铁蛋白肽携带的阳离子，构建了重组酵母GS115/pPIC9K-EGFP-APBSP-LfcinB-His，筛选出表达量最高的重组酵母，并对表达产物LfcinB-His进行分离纯化鉴定和抑菌活性检测。结果表明，LfcinB具有抗菌活性而构建的重组蛋白APBSP-LfcinB和EGFP-APBSP-LfcinB-His不具备抗菌活性。在甲醇诱导下的重组酵母GS115/pPIC9K-EGFP-APBSP-LfcinB-His的生长趋势高于GS115/pPIC9K-LfcinB-His，且SDS-PAGE电泳能检测出融合蛋白的高效表达，纯化分离后的LfcinB-His溶液作用于金黄色葡萄球菌ATCC25923、金黄色葡萄球菌CMCC26003、大肠杆菌ATCC25922、大肠杆菌C600时，平均抗菌效价分别为3.62×10~9、1.98×10~8、1.86×10~8、1.54×10~9 U/mL，具备较强的抗菌活性。本研究为进一步开展LfcinB的高密度发酵奠定了基础。
关键词：牛乳铁蛋白;;融合蛋白;;牛蛙皮肤蛋白抗氧化肽;;基因工程;;超滤浓缩
基金资助：四川省科技计划项目-科研院所科技成果转化项目（2022JDZH0036）;; 四川省科研院所科技成果转化基金项目（22YSZH0016）;; 江苏大学高水平大学-师资建设-科研启动基金（4111360007）;江苏大学高级专业人才科研启动基金（12JDG069）
