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作者：林伟朝;孙雯;孙晓萱;朱显峰;张保国;
单位：河南大学生命科学学院,微生物研究所;中国科学院上海高等研究院;
摘要：目的：本研究构建一株重组枯草芽孢杆菌工程菌，实现以苯酚、丙酮酸和氨为底物全细胞生成L-酪氨酸（L-tyrosine,L-Tyr），并优化其细胞培养条件和催化反应条件，以期提高L-Tyr的产量。方法：将来源于Pantoea agglomerans的酪氨酸酚裂解酶（Tyrosine Phenol-Lyase,TPL）经密码子优化后在枯草芽孢杆菌中异源表达，通过单因素实验优化了重组菌诱导表达条件和全细胞转化条件，旨在提高L-Tyr产量。结果：重组枯草芽孢杆菌在20℃，2.0 g/L木糖诱导培养36 h时TPL活性最高达到4.65±0.15 U·g~(-1)，在75 mmol/L苯酚、75 mmol/L丙酮酸钠、487 mmol/L氯化铵、2.0 g/L亚硫酸钠、2.0 g/L EDTA、0.08 g/L磷酸吡哆醛（Pyridoxal Phosphat,PLP）、湿菌体50 g/L、pH=8.0、35℃的全细胞转化条件下，L-Tyr达到9.38 g/L，转化率为73.24%。为了进一步改善高浓度苯酚导致TPL酶活力下降问题，在全细胞转化环节采用分批补料方式，20 h后得到15.12 g/L L-Tyr，转化率为75.51%。结论：研究结果表明重组枯草芽孢杆菌可以成功转化苯酚、丙酮酸钠合成L-酪氨酸，为全细胞生物制备食品级L-酪氨酸提供了理论和技术基础，具有良好的应用前景。
关键词：L-酪氨酸;;枯草芽孢杆菌;;酪氨酸酚裂解酶;;全细胞催化
基金资助：福建省中科院STS重大项目（2022T3004）
