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作者：白丽君;杜榕;贾宜萱;陶佩;魏培莲;
单位：浙江科技大学生物与化学工程学院;浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室;
摘要：本研究基于优化根癌农杆菌介导转化技术（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT），构建出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）遗传转化体系，旨在筛选高产聚苹果酸菌株。通过优化农杆菌初始浓度、预培养时间、共培养时间、共培养pH、乙酰丁香酮（AS）浓度、共培养温度等关键参数，利用潮霉素磷酸转移酶（hph）基因和增强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因作为筛选标记，从中筛选出高产聚苹果酸的出芽短梗霉菌株。最佳转化条件为：农杆菌初始OD_(600)值为0.6、预培养时间为8 h、共培养时间为72 h、共培养pH为5.2、AS浓度为100μmol/L，共培养温度为22℃。在优化条件下，成功构建了一批具有稳定T-DNA插入的转化菌株，其中高产突变株的聚苹果酸产量相比野生型菌株显著提升，最高提高74.59%。本研究为聚苹果酸工业化生产的菌株优化提供了重要的技术支持，并为其他工业微生物的遗传改造提供了宝贵的参考路径。
关键词：出芽短梗霉;;根癌农杆菌;;增强型绿色荧光蛋白;;遗传转化;;聚苹果酸
