来源：期刊VIP网 时间：
作者：张雪;马丽侠;叶德萍;易艳;姜展樾;周李华;谢贞建;
单位：成都大学食品与生物工程学院;中国测试技术研究院;
摘要：传统的致泻大肠埃希氏菌检验方法耗时较长，为缩短检测时间，构建了含致泻大肠埃希氏菌bfpB、ipaH、stp特征基因的质粒DNA标准物质候选物，针对bfpB、ipaH、stp基因建立一套可实现快速检测的微滴式数字PCR系统。用微滴数字PCR(Droplet Digital PCR,ddPCR)进行引物探针浓度和退火温度等体系优化后，以梯度稀释的质粒DNA为模板评估方法的线性相关性和精密度，添加非目标基因invE、sth为模板验证方法特异性，并将构建的ddPCR方法用于即食果蔬制品的实际检测。结果表明，bfpB、ipaH、stp质粒DNA最优引物终浓度均为400 nmol/L，最优探针终浓度分别为200、100、200 nmol/L;bfpB、ipaH、stp质粒DNA最优退火温度分别为60、58、58℃；特征基因bfpB、ipaH、stp分别在8.87～38700.00、3.33～36533.33、6.57～61833.33 copies/μL浓度范围呈线性相关，浓度梯度的线性相关系数r值均大于0.99;bfpB、ipaH、stp基因的定量限分别为15.33、7.97、15.00 copies/μL，检出限分别为8.87、3.33、6.57 copies/μL；方法精密度小于5%，特异性良好；实际样品检测结果显示，未加标样品未检出，而加标样品及阳性对照均可检出，ddPCR方法检测结果与国标方法检测结果一致。建立的方法可大大缩短致泻大肠埃希氏菌的检测时间，为食品中致泻大肠埃希氏菌的快速检测提供技术参考。
关键词：致泻大肠埃希氏菌;;毒力因子;;微滴式数字PCR;;质粒DNA标准物质候选物
基金资助：国家重点研发计划项目（2021YFF0701905）
