来源：期刊VIP网 时间：
作者：韩瑞;初文琴;刘振;
单位：中国海洋大学食品科学与工程学院,海洋食品加工与安全控制国家重点实验室;青岛市食品生物技术重点实验室;中国轻工业水产品生物加工重点实验室;
摘要：该工作旨在研究枯草芽孢杆菌表达系统中不同元件之间的适配性,从而构建高效蛋白分泌载体,并进一步应用于提高壳聚糖酶Csn21c的胞外表达量。首先,构建包含不同启动子(P43、P_(shuttle09))、核糖体结合位点(RBS1、RBS5)和信号肽(Snpr B、Spho D、Symz C)的12个质粒,并以分别以3种蛋白(琼胶酶Ag WH50C、壳聚糖酶Csn21c和脂肪酶Lip15)为指示蛋白比较不同元件组合的蛋白分泌水平,发现载体p P435Y*K(P43-RBS5-Symz C)和p P095P*K(P_(shuttle09)-RBS5-Spho D)优于其他载体。相较原载体(p P431N*K),载体p P435Y*K能使琼胶酶Ag WH50C酶活性提高184.25%,脂肪酶Lip15酶活性提高52.8%,壳聚糖酶Csn21c酶活性提高164.62%。最后,通过比较5种不同培养基,确定了TB培养基为壳聚糖酶Csn21c的最适发酵培养基,使用TB培养基壳聚糖酶Csn21c的最高酶活力达到21.14 U/m L,较LB培养基的酶活力提高了128.31%。
关键词：枯草芽孢杆菌;;分泌;;启动子;;核糖体结合位点;;信号肽;;壳聚糖酶
基金资助：国家自然科学基金项目(32172178)
