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作者：尹红梅;侯忠余;王金丽;唐俊妮;
单位：西南民族大学食品科学与技术学院;青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室;
摘要：目的：对一株新型普通变形杆菌噬菌体中的裂解酶Lys66进行基因克隆、蛋白表达纯化及活性分析。方法：将噬菌体全基因序列在Genbank数据库中进行对比，挖掘出裂解酶基因序列，并对其进行克隆，进一步在大肠杆菌中表达蛋白并纯化，探究其抑菌效果。结果：通过比对挖掘出与裂解酶相似度较高的基因序列，大小为393 bp；利用ExPAsy Bioinformatics Resource Portal预测裂解酶的分子质量为15.20 kDa，等电点为9.40，由130个氨基酸组成，将优化的合成基因构建到载体pET-32α中，得到重组质粒pET-32α-lys66，并将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后诱导其表达，经纯化验证后，获得1.86 mg/mL的重组裂解酶Lys66蛋白。裂解酶Lys66在平板上的抑菌圈直径为19.30 mm；对15株受试菌株中的13株经氯仿处理的革兰氏阴性菌均表现出裂解活性，宿主谱较广。Lys66(1.89 mg/mL)与乙二胺四乙酸(1 mmol/L)联用，2 h后OD600 nm下降0.61，抑菌效果较好。结论：本研究重组表达的裂解酶Lys66具有良好的抑菌效果，可作为一种潜在的抗菌剂。
关键词：变形杆菌;;噬菌体裂解酶;;抗菌剂;;食品安全
基金资助：“十三五”国家重点研发计划重点专项(2018YFD0500500);; 西南民族大学中央高校基本科研业务费专项(2020NTD04)
