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作者：汪吉鹏;朱滕滕;刘璐;马铖;魏晓博;刘慧燕;方海田;
单位：宁夏大学食品科学与工程学院,宁夏食品微生物应用技术与安全控制重点实验室;宁夏三十六度生物科技有限公司;
摘要：本研究旨在通过λ-Red重组技术结合复合诱变方法提高大肠杆菌L-异亮氨酸合成能力。以E. coli NXA为出发菌株，首先采用λ-Red同源重组敲除编码支链氨基酸转运蛋白基因brnQ，获得突变菌株E. coli NXA1。然后将E. coli NXA1经常温常压等离子体（ARTP）、紫外（UV）与亚硝基胍（NTG）多轮复合诱变，以α-氨基丁酸（α-AB）为结构类似物进行筛选，筛选得到突变菌株E. coli NXA2。摇瓶发酵结果表明，在37℃、200 r/min条件下发酵40 h后，E. coli NXA1的L-异亮氨酸滴度为2.76 g/L，较E. coli NXA提高了33.98%;E. coli NXA2的L-异亮氨酸滴度为3.22 g/L，较E. coli NXA1提高了16.67%，较E. coli NXA提高了56.31%。对菌株E. coli NXA2经连续传代20代后，表现出较好的遗传稳定性。λ-Red重组技术结合复合诱变对大肠杆菌提高L-异亮氨酸合成能力有明显效果，为选育L-异亮氨酸高产菌株奠定理论基础。
关键词：大肠杆菌;;λ-Red重组技术;;brnQ基因;;复合诱变;;发酵;;L-异亮氨酸
基金资助：宁夏自然科学基金项目（2020AAC03100）;; 银川市科技计划项目（2023NYHZC01,2024NYHZC002）
