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作者：杨雪丽;牛犇;陈杭君;吴伟杰;王冠楠;房祥军;穆宏磊;郜海燕;
单位：中国计量大学生命科学学院;浙江省农业科学院食品科学研究所,农业农村部果品采后处理重点实验室,浙江省果蔬保鲜与加工技术研究重点实验室,中国轻工业果蔬保鲜与加工重点实验室;
摘要：目的：优化猴头菇纳米囊泡的制备方法，考察其抗氧化活性以及对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。方法：采用差速离心与蔗糖密度梯度离心联用法制备猴头菇纳米囊泡（Hericium erinaceus-derived extracellular nanovesicles,HEDENVs），采用单因素实验和响应面试验对纳米囊泡的制备条件进行优化，并用激光纳米粒度仪与透射电镜对其粒径、Zeta电位和形貌进行表征；利用液相色谱质谱联用仪（Liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS）对纳米囊泡进行脂质组学和蛋白质组学分析；通过DPPH、ABTS~+和O_2~-自由基清除率评价纳米囊泡的抗氧化活性；H_2O_2构建Caco-2细胞氧化应激损伤模型，采用激光共聚焦显微镜测定细胞中ROS含量变化。结果：纳米囊泡最佳制备条件：蔗糖浓度25%，离心时间2 h，离心转速86000 r/min，此时纳米囊泡的浓度为402.24μg/mL；纳米囊泡为具有膜结构的小泡，粒径110.7±16.9 nm,PDI 0.551,Zeta电位-14.2 mV；基于脂质组学和蛋白质组学分析，鉴定出纳米囊泡中大约含有346种脂质与52种蛋白质。体外抗氧化结果表明，400μg/mL纳米囊泡的DPPH自由基清除率为94.79%、ABTS~+自由基清除率为96.67%、O_2~-自由基清除率为96.83%；在H_2O_2构建的Caco-2细胞氧化损伤模型中，纳米囊泡能显著减少损伤细胞中ROS的产生。结论：体外多种抗氧化评价方法表明纳米囊泡具有一定的抗氧化活性。
关键词：猴头菇;;纳米囊泡;;工艺优化;;结构表征;;组学分析;;Caco-2细胞;;抗氧化
基金资助：国家自然科学基金（32172282）;; 国家重点研发计划课题（2021YFD2100502）;; 浙江省高层次人才特殊支持计划（2022R52025）
