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作者：洪晨铖;胡子璇;Josef VOGLMEIR;刘丽;
单位：南京农业大学食品科技学院;
摘要：本文通过开发新型N-乙酰氨基半乳糖基转移酶用于黏蛋白体外O-糖基化修饰。通过构建源自普通楼燕（Apus apus）的ppGalNAcT基因重组表达载体，命名为AappGalNAcT11，并将其导入毕赤酵母细胞GS115中进行异源表达。通过酶促反应体系测定其催化活性，并分析最适反应温度及其温度稳定性、最适反应pH及其pH稳定性、金属离子依赖性及4℃储藏稳定性等生化特性。结果表明，该目的蛋白的分子量大小约为42.1 kDa,AappGalNAcT11能够特异性地将UDP-GalNAc中的GalNAc连接到多肽EA2上，并且还能够实现向受体蛋白SUMO-MUC5AC上添加1～3个GalNAc，形成三种不同的Tn抗原结构。该酶的最适反应温度为37℃，在20～40℃孵育75 min后，均能保持95%以上活力，最适反应pH为9.0,pH在7～9时，孵育5 d后，残余酶活力均保留在80%以上。其催化活性显著依赖于锰离子的存在；此外，该酶具有良好的4℃稳定性，储藏21 d后，仍能保持80%的相对活性，对EA2的Km、Kc_at及Kc_(at)/Km的值分别为1.152 mmol·L-1、21.145 min-1、18.6μmol·L-1·min-1，表明AappGalNAcT11具有较高的催化效率。本研究为黏蛋白体外O-糖基化修饰提供了新的工具酶AappGalNAcT11，同时也为该酶在生物合成及食品领域的应用奠定了理论基础。
关键词：多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶;;酵母表达;;糖基化修饰;;酶学特性
基金资助：国家自然科学基金（31871793,31871754）
