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作者：於文慧;王禕天;胡丹;韩瑨;黄晓宇;张冉菁;吴正钧;
单位：上海海洋大学食品学院;光明乳业股份有限公司乳业研究院,上海乳业生物工程技术研究中心,乳业生物技术国家重点实验室;
摘要：本研究探索了一种乳杆菌产生的胞外多糖在体外缓解重金属铅毒性的作用及潜在的机制。从发酵粘液乳杆菌B44在脱脂乳中产生的胞外多糖中分离得到一种纯多糖（B44-EPS），通过细胞活力、细胞内活性氧（ROS）、细胞内铅含量、粘蛋白和紧密连接蛋白表达等指标，研究B44-EPS在体外对Caco-2细胞铅暴露后毒性的缓解效果。结果表明，B44-EPS分子量为3.05×10_6 Da，由氨基葡萄糖、葡萄糖和半乳糖组成，三种单糖基的摩尔比为4.5%:86.6%:8.9%。当Caco-2细胞与10 mg/L铅共孵育6 h后，相较于Pb对照组，20μg/mL（低）、200μg/mL（高）浓度的B44-EPS能分别提高Caco-2细胞活力22.08%(P<0.05)、32.47%(P<0.05)，并下调细胞内ROS含量10.34%(P<0.0001)、20.19%(P<0.001)；同时在低浓度B44-EPS的干预下，Caco-2细胞对紧密连接蛋白（zonula occludens-1,Zo-1）、粘蛋白2(Muc2)、紧密连接蛋白1(Claudin-1)mRNA的表达分别上调96.36%(P<0.01)、414.29%(P<0.001)和89.29%(P<0.01)，对紧密连接蛋白4(Claudin-4)m RNA的表达则下调95.5%(P<0.0001)。此外，在10 mg/L Pb暴露的Caco-2细胞单层中，低、高浓度B44-EPS能分别使细胞内铅含量降低56.08%(P<0.01)、 80.1%(P<0.001)；分别使细胞单层的跨膜电阻（TEER）升高44.52%(P<0.0001)、43.96%(P<0.0001)，对异硫氰酸荧光素-右旋糖苷（FITC-Dextran）的表观渗透率（Papp）下降64.91%(P<0.001)、60.16%(P<0.001)。综上，20～200μg/mL的B44-EPS可通过降低细胞内铅含量、提高Caco-2细胞单层的完整性，降低铅暴露对Caco-2细胞的毒性。
关键词：胞外多糖;;发酵粘液乳杆菌;;脱毒作用;;紧密连接蛋白;;铅
基金资助：国家自然科学基金（82300626）;; 上海市国资委企业创新发展与能级提升项目（2022013）
