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作者：石帆;侯轶;赵劲松;胡松青;
单位：华南理工大学食品科学与工程学院;华南理工大学轻工科学与工程学院;
摘要：为了实现环状多肽c Lunasin的全生物合成，本文设计了合成cLunasin的线性前体aLunasin，构建了含MBP与SUMO双标签的重组表达载体，应用大肠杆菌重组表达aLunasin后经多肽连接酶Butelase 1介导合成cLunasin，进一步通过圆二色光谱、内源荧光光谱和细胞实验探究了环化对Lunasin热稳定性、结构特性与抗结直肠癌活性的影响。结果显示，37℃诱导后重组蛋白成功表达，质谱鉴定结果显示Butelase 1成功环化aLunasin，通过该法每升发酵液可以制备6.36 mg的电泳纯cLunasin。圆二色光谱与内源荧光光谱结果表明，环化在一定程度上提升了Lunasin结构的有序性与致密性。而且，环化改善了Lunasin的热稳定性，在97℃孵育30 min后，多肽保留率从Lunasin的62.3%提高到c Lunasin的74.9%。cLunasin对结直肠癌HCT-116细胞的半抑制浓度为15.2μmol/L，显著低于Lunasin的30.3μmol/L，抗结直肠癌活性增强。本文建立了一种cLunasin的绿色生物合成方法，为活性多肽的改造与重组表达提供有益探索。
关键词：大豆;;Lunasin;;重组表达;;环化;;Butelase 1;;稳定性;;抗结直肠癌活性
基金资助：国家自然科学基金（32072157）
