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作者：刘颖达;刘海媛;苏娜;李庆辉;刘佳;TUYATSETSEG Jambel;伊丽;吉日木图;
单位：内蒙古农业大学,乳品生物技术与工程教育部重点实验室;中蒙生物高分子应用研究联合实验室;内蒙古中哈骆驼研究院;
摘要：酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点，是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而，传统的ELISA方法具有较大的局限性，比如使用时抗体易受温度影响，容易变性，贮存期短，易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_1(aflatoxin M_1,AFM_1)纳米抗体(nanobody-M4, Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha, C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_1的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay, icELISA)。在最佳实验参数下，AFM_1的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_1类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计，且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外，将所开发的方法应用于实际样品中AFM_1的分析，结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R~2=0.995)。该研究表明，自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略，今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。
关键词：竞争性酶联免疫吸附实验;;纳米抗体;;多聚化;;灵敏度增强方法
基金资助：内蒙古自然科学基金(2020BS03011);; 国家重点研发计划项目(2020YFE0203300);; 内蒙古自治区科技成果转化专项资金项目(2021CG0021);; 内蒙古农业大学食品科学与工程学院科技计划项目(SPKJ201913)
