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作者：陈政;柴丽娟;张晓娟;许泓瑜;史劲松;王松涛;张宿义;沈才洪;许正宏;陆震鸣;
单位：江南大学生物工程学院;江南大学,粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心;江南大学生命科学与健康工程学院;国家固态酿造工程技术研究中心;四川大学轻工科学与工程学院;
摘要：建立实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR)方法对大曲中3种高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris、T.intermedius和T.daqus)进行特异性定量检测。根据T.vulgaris、T.intermedius、T.daqus全基因组中特异性单拷贝核心基因recA、mdH、gyrA为参考序列分别设计了一对可扩增278、233、291 bp片段的引物；经特异性、有效性、准确性实验显示，在常见的13种白酒酿造微生物中，引物TV、TI、TD分别可特异性检测T.vulgaris、T.intermedius、T.daqus,检测范围为2.82～8.82 lg copies/μL,加标回收率95%～105%。进一步对大曲发酵过程样品检测，结果显示，T.vulgaris含量在呈现波动趋势，在第5天达到最高，为(6.06±0.02) lg copies/g;T.intermedius含量呈现先上升后下降的趋势，在第7天达到最高，为(6.33±0.13) lg copies/g;T.daqus含量在0～12 d呈现波动趋势，在12～14 d下降，随后一直上升，发酵结束时含量最高，为(7.62±0.02) lg copies/g。该研究建立的RT-qPCR方法可对大曲发酵过程中3种高温放线菌进行特异性鉴定和快速定量，为进一步监测高温放线菌在白酒酿造过程中的功能提供了方法。
关键词：大曲;;高温放线菌;;特异性引物;;实时荧光定量PCR
基金资助：国家科技基础资源调查专项(2021FY100900)
