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作者:谢桂勉;黄莹星;林俊虹;张世伟;
单位:揭阳职业技术学院;深圳市计量质量检测研究院;国家市场监管技术创新中心(智能光电传感);
摘要:莫米松糠酸酯(mometasone furoate, MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate, MDF),合成了免疫半抗原和包被半抗原。免疫半抗原以活泼脂法连接钥孔血蓝蛋白获得全抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得能够稳定分泌抗MF单克隆抗体的细胞株,制备并纯化了抗体。该抗体的主要识别区域为MF的五元环区域,因此不和常见的64种糖皮质激素发生交叉反应。建立了基于异源包被的MF间接竞争酶联免疫检测法,其半抑制浓度(IC_(50))为1.2 ng/mL,对肌肉和肝脏的最低检出限分别为0.52μg/kg和0.59μg/kg。灵敏度相比于同源包被提升了20倍。使用60%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率为70%~82%。该方法能有效应用于动物组织中MF的快速筛查。
关键词:糖皮质激素;;莫米松糠酸酯;;单克隆抗体;;异源包被;;间接竞争酶联免疫检测法(ic-ELISA)
基金资助:深圳市科技计划项目(KCXFZ20230731092859013);; 揭西县产业技术研究与开发专项资金项目(揭西工信科技[2023]158号)