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作者：张颖;董耀;吕云斌;王绍琛;冯治洋;
单位：南京农业大学食品科技学院;
摘要：土壤中大量的非培养微生物是新酶发现的重要资源。该研究利用功能宏基因组学策略筛选获得高活性酯酶，并对其进行鉴定分析。采用三丁酸甘油酯平板法对土壤微生物宏基因组文库中具有酯酶活性的克隆进行筛选，获得高活性的阳性克隆，通过生物信息学分析和生化实验对酯酶的酶学性质进行研究表征。获得一个比活力高达(3 957±3) U/mg的酯酶AesZF899,该酯酶为不含信号肽的酯酶第四家族胞内酯酶，蛋白大小34 kDa,与来自Afipia sp.P52-10中未表征的α/β水解酶(GenBank登录号为WP＿034470467.1)一致性达76.43%。AesZF899的最佳底物为对硝基苯乙酸酯，酶反应的最适pH值和最适温度分别是9.0和40℃。AesZF899在30℃温育8 h后仍可保持初始活性，在35、40℃分别温育7和4 h后仍可保持50%的活性，在反应温度大于80℃后酶活性丧失。终浓度10 mmol/L的Fe~(3+)可以增强酶活性，而终浓度10 mmol/L的Na~+、Li~+和Mg~(2+)有较强的抑制作用。体积分数为1%二甲基亚砜可以增强酶活性，异戊醇也对酶活性有一定的促进作用。
关键词：酯酶;;HSL家族;;宏基因组;;异源表达;;高活性
基金资助：国家自然科学基金面上项目(31770049)
