来源：期刊VIP网 时间：
作者：程逸凡;张萌;许菲;
单位：江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室;
摘要：重组胶原蛋白是一种具有广泛应用潜力的生物材料，近年来引起了生物医学、组织工程等众多领域的关注。胶原蛋白的3股螺旋结构赋予其独特的生物学功能和生物相容性，但也增加了其在微生物系统中表达的复杂性。该研究以细菌胶原蛋白V-B作为模式蛋白，通过对表达元件的优化，促进重组胶原蛋白在谷氨酸棒杆菌中的表达。首先通过启动子筛选和发酵时长优化，获得介导V-B表达的最优启动子tac-R0。接着利用RBS calculator设计核糖体结合位点（ribosomal binding site,RBS）和间隔序列（aligned spacing,AS）的突变文库，得到与tac-R0启动子搭配组合的最优RBS和AS，使V-B的产量提高至514 mg/L。此外，通过多基因表达盒的串联组合策略，将多个目的基因串联，最终V-B的产量较初始水平提高了8.4倍，达697 mg/L，该研究为重组胶原蛋白的工业化生产提供了基础。
关键词：重组胶原蛋白;;谷氨酸棒杆菌;;启动子;;核糖体结合位点;;串联表达
基金资助：国家自然科学基金（22078129）
