来源：期刊VIP网 时间：
作者：开朗;杨昊;朱道君;陈旭升;
单位：江南大学生物工程学院;工业生物技术教育部重点实验室(江南大学);
摘要：小白链霉菌（Streptomyces albulus）是工业上生产ε-聚赖氨酸的主要菌株。为提高S. albulus的ε-聚赖氨酸合成能力，基于诱变和抗性筛选的传统育种方法被普遍应用。然而，由于传统育种存在“疲劳效应”，当前S. albulus的育种陷入了瓶颈。为利用代谢工程方法进一步提高S. albulus的ε-聚赖氨酸合成能力，亟需建立基于CRISPR-Cas9的基因编辑方法。为此，该文以S. albulusGS114为研究对象，以ε-聚赖氨酸合成酶基因pls为靶基因，构建了CRISPR-Cas9基因敲除系统，成功敲除了pls，编辑效率为100%。为进一步提高获得的敲除株数量，对S. albulusGS114结合转移条件进行了系统优化，获得的最优结合转移条件为：供受体比例1∶1，镁离子浓度30 mmol/L,55℃热激孢子10 min，培养20 h后覆盖抗生素。在最优转移条件下，结合转移效率达到2.5×10~(-8)，较优化前提高了78%。该研究结果一方面为后续S. albulus的代谢工程改造提供了重要工具，另一方面为其他工业链霉菌构建CRISPR-Cas系统提供了重要参考。
关键词：放线菌;;小白链霉菌;;CRISPR-Cas9系统;;基因敲除
基金资助：国家重点研发计划项目（2020YFA0907700）;; 江苏省重点研发计划项目（BE2022703）
