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作者：曹琳彩;文舜华;王凯;刘旭炜;胡卓炎;赵雷;沈兴;
单位：华南农业大学食品学院;
摘要：荔枝类甜蛋白(litchi thaumatin-like protein, LcTLP)是导致部分人群过量食用荔枝引起机体炎症反应的主要原因之一，为深入探究其引起的机体炎症机制，揭示其晶体结构与促炎活性位点等生物学特性，需获得大量高纯度LcTLP。然而现有报道中鲜见大量获取高纯度可溶性LcTLP的提取方法，因此该研究对LcTLP基因进行密码子优化后构建了表达载体pCold-NusA-LcTLP,并成功表达了可溶重组蛋白NusA-LcTLP。通过亲和层析与凝胶过滤层析两步纯化法，最终得到的重组蛋白产量可达36.26 mg/L,纯度达90%以上，表明该纯化方案可高效制得高纯度重组LcTLP。经RAW264.7细胞炎症活性验证，重组LcTLP在1、2μg/mL时刺激细胞NO分泌量分别为12.75、14.68μmol/L,为空白组的2.91、3.36倍，验证了重组LcTLP具有一定的促炎活性。该表达载体与纯化方案高效表达得到了可溶性重组LcTLP,为后续深入研究LcTLP在细胞生命活动中的功能机制奠定了基础。
关键词：荔枝;;重组类甜蛋白;;诱导表达;;纯化;;活性鉴定
基金资助：广东省自然科学基金项目(2023A1515012599);; 国家自然科学基金项目(31771980)
