来源：期刊VIP网 时间：
作者：章升霞;王绍琛;吕云斌;冯治洋;
单位：南京农业大学食品科技学院;
摘要：该文旨在从土壤中挖掘新型β-内酰胺类抗生素耐药基因，分析耐药机制，做好临床预警，为开发新型β-内酰胺类药物提供信息。利用功能筛选策略，从土壤宏基因组文库中筛选获得阳性克隆，通过亚克隆构建和序列测定，得到耐药基因序列。利用序列比对、系统发育树分析、三维结构建模等生物信息学方法对耐药基因进行分析。使用微量肉汤稀释法评估β-内酰胺酶的耐药活性，利用生化实验分析酶水解抗生素的能力。鉴定出一个β-内酰胺抗生素耐药基因，与已知的β-内酰胺酶基因最高只有52.30%氨基酸序列一致性，命名为gob-54,编码β-内酰胺酶GOB-54。SWISS-MODEL三维建模发现GOB-54与临床来源的GOB-18具有高度相似的结构。动力学参数表明在所测试的β-内酰胺抗生素中，GOB-54对哌拉西林具有最高的亲和力和催化活性，动力学参数K_m和K_(cat)/K_m分别为121.82μmol/L和49.15 L/(mmol·s)。该研究利用功能宏基因组学方法挖掘出土壤来源的β-内酰胺抗生素耐药基因gob-54,编码广谱β-内酰胺酶GOB-54,为临床上监测和防控β-内酰胺类抗生素耐药基因的传播提供借鉴。
关键词：β-内酰胺酶;;土壤微生物;;功能宏基因组学;;抗生素耐药基因
基金资助：国家自然科学基金项目(32370089)
