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作者：孙晓瑄;张瑞婕;孙雯;陈凌宇;朱显峰;张保国;
单位：河南大学生命科学学院,微生物研究所;中国科学院上海高等研究院;
摘要：本实验研究了一种来自微小囊担子菌MCA4210(Cystobasidium minutum MCA 4210)的氨肽酶基因dmpA催化合成L-肌肽的能力，构建基因工程菌株，以L-组氨酸和β-丙氨酸甲酯盐酸盐为底物催化合成L-肌肽，旨在提高L-肌肽的合成效率。将Cystobasidium minutum MCA 4210来源的DmpA经密码子优化后在大肠杆菌BL21(DE3)(Escherichia coli BL21(DE3))中异源表达，并通过与麦芽糖结合蛋白(Maltose Binding Protein,MBP)进行融合表达提高目的蛋白可溶性表达和粗酶活性，构建重组菌株BL21(DE3)-MBP-DmpA，对重组菌株进行诱导表达条件和转化条件的探究。结果表明，实验成功将目的基因片段与MBP相连得到重组菌株BL21(DE3)-MBP-DmpA，经诱导条件优化粗酶活达到了145 U；经转化条件优化L-肌肽产量高达55.72 g/L，产率达54.54%。本研究将具有L-肌肽合成功能的Cystobasidium minutum MCA 4210来源的DmpA在大肠杆菌中异源表达，通过添加助溶标签和条件优化实现了L-肌肽的高效生产，所得L-肌肽的产量为目前报道最高，为基因工程菌工业化生产L-肌肽提供了实验基础，具有良好的应用前景。
关键词：氨肽酶DmpA;;L-肌肽;;麦芽糖结合蛋白;;异源表达;;酶催化转化
基金资助：福建省中科院STS重大项目（2022T3004）
