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作者：黄俊宝;黄茜琳;陈宇;高旭丽;罗雅妮;陶伟;郭明雨;刘永圆;吴晶;刘艳;
单位：安徽工程大学生物与食品工程学院;
摘要：维生素K_2(Vitamin K_2,MK)是一种重要的天然化合物，在治疗多种疾病方面都有着重要的作用。为探究枯草芽孢杆菌甲萘醌途径中关键基因menD表达量的不同对于细菌生长、生物膜形态与MK合成的影响，以枯草芽孢杆菌168(Bacillus subtilis 168,BS168)为出发菌株，构建BS168-ΔmenD、BS168-P_(43)-menD、BS168-P_(xylA)-menD突变菌株，使用HPLC检测菌株中MK的含量，使用western-blot检测蛋白质的表达强度，以确定menD在枯草芽孢杆菌中对于MK合成的作用。研究发现，BS168-ΔmenD菌株生长缓慢，无法很好的产生生物膜，在培养基中需要添加甲萘醌标准品细胞才能生长；BS168-P_(43)-menD、BS168-P_(xylA)-menD突变菌株的生物膜和MK的含量与原始菌株都有较为显著的差异。静态发酵时，孔板中重组菌株BS168-P_(43)-menD、BS168-P_(xylA)-menD生物膜的形成量和褶皱程度相较于原始菌株得到较大的提升，BS168-P_(43)-menD、BS168-P_(xylA)-menD重组菌株的生物膜形成量分别为原始菌株的1.36倍与1.59倍，同时，BS168-P_(43)-menD、BS168-P_(xylA)-menD MK产量分别为原始菌株的1.64倍和1.87倍，BS168-P_(xylA)-menD的最大产量达39.27 mg/L。结果表明，作为枯草芽孢杆菌中MK合成途径的关键酶，menD的表达量是影响枯草芽孢杆菌中生物膜与MK形成的重要因素。
关键词：枯草芽孢杆菌;;维生素K_2;;启动子;;表达强度;;菌株选育
基金资助：国家自然科学基金项目(32372295);; 安徽省高校杰出青年科研项目(2023AH020013);; 安徽省大学生创新创业计划项目(202310363254)
