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作者：韦欢;林苹鑫;刘秀霞;刘春立;杨艳坤;李业;白仲虎;
单位：江南大学,粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心;江南大学,工业生物技术教育部重点实验室;韩国科学技术院环境与分子微生物实验室;
摘要：三乙酸内酯(triacetic acid lactone, TAL)是一种具有广泛应用前景的聚酮，可用作各种有机化合物的前体。为了提高酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中TAL的产量，该研究利用基因组重复序列整合的方法构建了S.cerevisiae多拷贝整合系统，应用该系统提高TAL的生产。首先以绿色荧光蛋白表征多拷贝Delta1整合，通过截短遗传霉素和潮霉素B两种抗生素基因的启动子以及增加抗生素浓度的方法增加筛选压力，进而提高整合效率和拷贝数，最优参数为将抗生素基因启动子截短至15 bp的同时采用160μg/mL的抗生素。将该优化系统随后用于新的多拷贝整合位点Delta2的表征。最后应用该系统合成TAL,通过HPLC分析TAL产量。结果表明，利用Delta1和Delta2序列表征绿色荧光蛋白的最高拷贝数分别为10和7,Delta1略优于Delta2。应用该系统在S.cerevisiae中合成TAL,Delta1和Delta2的产量分别为1.50、1.17 mmol/L,比单拷贝菌株产量分别提高460%和337%。该多拷贝系统有效提高了TAL的产量，为S.cerevisiae异源途径的表达提供了一种高效、模块化的多拷贝整合方法。
关键词：酿酒酵母;;多拷贝整合;;Delta整合;;三乙酸内酯;;启动子
基金资助：国家自然科学基金(21878124)
