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作者：余金兰;何倩;李欣茹;谭红晓;路来风;
单位：天津市食品质量与健康重点实验室,天津科技大学食品科学与工程学院;
摘要：RNA干扰(RNA interference, RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象，引发细胞内同源靶基因特异性抑制或沉默。RNAi技术已应用在害虫防治、抑菌、抗病毒等多个领域，但在控制农产品品质劣变中应用较少。该研究以大肠杆菌RNaseⅢ缺陷型菌株HT115(DE3)为发酵平台，以L4440载体为骨架构建重组载体，进行马铃薯多酚氧化酶StPPO编码基因的dsRNA表达与发酵条件优化，并进行dsRNA-StPPO生物学功能验证。结果表明，异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl thiogalactoside, IPTG)诱导剂浓度为0.6 mmol/L,诱导时间为6 h,外加酵母浸粉0.48%,温度为39℃,装瓶量为45 mL/250 mL,转速为189 r/min时，目标dsRNA的产量最高，达3.95μg/mL。浸泡dsRNA-StPPO溶液后，处理组鲜切马铃薯较对照组有较高的L~*、较低的a~*和褐变指数，且组织中的多酚氧化酶酶活力较低，说明施用dsRNA-StPPO可以抑制马铃薯polyphenol oxidase StPPO基因表达有效控制鲜切褐变现象。
关键词：大肠杆菌;;双链RNA;;外源施用;;鲜切褐变;;多酚氧化酶
基金资助：国家自然科学基金面上项目(32272395);; 天津市食品质量与健康重点实验室(天津科技大学)开放课题资助项目(TJS202105)
