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作者：李针;金丹青;徐炫;王坤;李佳瑶;任春芝;唐红军;王玉梅;孙坤来;
单位：浙江海洋大学食品与药学学院;北京石油化工学院新材料与化工学院;舟山市妇幼保健院;四川聚元药业集团有限公司;
摘要：以江珧[Pinna(Atrina)pectinate]柱为原材料，探究水解肽的抗氧化水平及对H_2O_2诱导的氧化损伤细胞的保护作用。采用可控酶解技术、以DPPH自由基清除率和水解度(hydrolysis degree, DH)作为评价指标，筛选最佳水解酶，并优化酶解条件；运用超滤、Q强阴离子交换快速流层析柱(Q sepharose fast flow, QFF)、反相高效液相色谱(reversed phase high-performance liquid chromatography, RP-HPLC)、氨基酸N端测序和质谱分析，分离、鉴定活性酶解肽；以H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)为氧化损伤模型，研究活性肽对氧化损伤细胞的保护作用。研究发现，最佳酶解条件为：木瓜蛋白酶，37℃、pH 8.0、加酶量3.0%、料液比1∶20(g∶mL)、酶解时间3.0 h。从该条件酶解产物中分离、鉴定得到5条寡肽，经质谱和氨基酸序列分析确定其分别为Val-Ala-His(JY1,325.18 Da)、Glu-Pro(JY2,244.11 Da)、Ala-Val(JY3,188.12 Da)、Trp-Tyr(JY4,367.15 Da)、Trp-Val(JY5,303.16 Da)。其中JY1、JY4表现出较好的抗氧化活性，其对DPPH自由基、ABTS阳离子自由基、超氧阴离子自由基3种自由基清除活性的EC_(50)分别为(2.102±0.01)、(4.215±0.024)、(3.019±0.021) mg/mL,(2.981±0.014)、(5.385±0.027)、(4.204±0.031) mg/mL;并可减少细胞氧化损伤，显著提升H_2O_2诱导的HUVEC损伤细胞存活率。由此可见，江珧柱蛋白可以酶解产生具有抗氧化作用的活性的肽，并对H_2O_2诱导的HUVEC细胞氧化损伤起保护作用，为心血管疾病的预防和治疗、江珧柱的开发利用和抗氧化产品的开发提供理论依据和参考。
关键词：江珧;;酶解肽;;抗氧化;;氧化损伤保护
基金资助：浙江省中医药科技计划项目(2023ZR057);; 舟山市医药卫生科技计划项目(2022YA10,2022YA14);; 国家级大学生创新创业训练计划项目(202210340027,2024J00298);; 达州市市校合作专项项目
