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作者：彭博;洪麟;高世光;陈文超;赵欣;刘彦泓;郑秋月;
单位：大连民族大学生命科学学院,生物技术与资源利用教育部重点实验室;大连市检验检测认证技术服务中心,国家市场监督管理总局技术创新中心(食用农产品安全快速检测与追溯);丹东海关综合技术服务中心;
摘要：本文建立了虹鳟和大西洋鲑两种三文鱼源性成分可视化和荧光环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)及重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)快速检测方法。以COI基因作为靶标基因，设计筛选适于等温扩增的引物序列，开展等温扩增方法的特异性和灵敏度分析，同时比较基于快速DNA提取和磁珠提取DNA的LAMP方法的适用性。结果表明，所构建的LAMP和RPA等温扩增方法特异性强，使用磁珠法提取DNA的LAMP检测的灵敏度分别可达到2.99×10~(-1) ng/μL和5.16×10~(-3) ng/μL，使用快速提取DNA的LAMP检测灵敏度分别可达到9.42×10~0 ng/μL和1.13×10~1 ng/μL。同时制备模拟混合样品，发现虹鳟和大西洋鲑成分RPA等温扩增的灵敏度可达到0.1%(W/W)，可视化LAMP等温扩增的灵敏度可稳定达到0.5%(W/W)。LAMP和RPA方法满足低技术要求、低设备成本以及检测时间短的快速检测要求。同时使用裂解液快速提取基因组DNA，可以在30～40 min之内完成检测，对于生产加工及市场等流通环节现场进行三文鱼成分真实性检测是一个很好的选择。
关键词：虹鳟;;大西洋鲑;;环介导等温扩增;;重组酶聚合酶扩增
基金资助：国家市场监督管理总局科技计划项目(2023MK130)
