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作者：黄宗潇;侯倩;徐岩;黄卫宁;穆晓清;
单位：江南大学生物工程学院,酿造微生物与应用酶学研究室;江南大学食品学院;
摘要：作为传统发酵食品的核心功能菌株，类食品乳杆菌(Lactobacillus paralimentarius)的代谢调控网络解析常受限于低效的遗传操作体系。该研究旨在开发一种高效、无痕的CRISPR/Cas9基因编辑平台，以解决类食品乳杆菌多基因编辑的技术瓶颈。通过优化质粒大小以及引入λ-Red重组酶辅助同源重组，构建了双质粒系统(pCRI01/pCRI02)。实验结果表明，该系统显著提升了转化效率[单基因敲除转化子达(63±11)个，阳性突变率75%],并实现了三基因同步敲除[转化子(57±8)个，突变率(46±7)%]。创新性整合BioBricks模块化组装、温度敏感型复制子及自靶向诱导型sgRNA技术，使多基因编辑周期缩短40%以上。该体系突破了传统方法的效率限制，成功实现多基因无痕编辑，为构建类食品乳杆菌高效细胞工厂提供了关键性技术支撑。
关键词：类食品乳杆菌;;CRISPR/Cas9;;多基因编辑;;λ-Red重组酶;;BioBricks组装
基金资助：优质高效“微生物制造”技术研发项目(2022YFD2101201)
