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作者：何林曼;钮成拓;刘国正;郑飞云;刘春凤;王金晶;李崎;
单位：工业生物技术教育部重点实验室(江南大学);江南大学生物工程学院;
摘要：胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，广泛应用于皮革、食品加工、生化检测和制药行业。该文旨在挖掘不同来源的胰蛋白酶，并在Komagataella phaffii GS115进行异源表达，最终分析并比较其酶学性质。通过基因挖掘手段分别克隆了人源胰蛋白酶(homo spanies trypsin, HST)、牛源胰蛋白酶(bos taurus trypsin, BTT)、虾源胰蛋白酶(penaeus vannamei trypsin, PVT)和弗氏链霉菌源胰蛋白酶(Streptomyces fradiae trypsin, SFT),以pPIC9k为载体构建重组质粒，并在Komagataella phaffii GS115中成功实现异源表达。经纯化激活后，HST,BTT,PVT,SFT的酰胺酶活性分别为18.6、12.3、44.7、13.8 U/mL;4种来源胰蛋白酶的最适温度分别为20、35、40、45℃,而其最适pH值分别为9、8.5、8.5、9,其中SFT在pH 9～11的稳定性更优。
关键词：胰蛋白酶;;基因挖掘;;异源表达;;毕赤酵母;;酶学性质
基金资助：国家重点研发计划子课题(2021YFC2100404)
