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作者：柯文锋;李诗洁;郑梦林;白仲虎;杨艳坤;
单位：江南大学,工业生物技术教育部重点实验室;江南大学,粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心;江苏省生物活性制品加工工程技术研究中心;
摘要：鲎C因子是一种对痕量内毒素高度敏感的丝氨酸蛋白酶原，在医药行业可替代鲎试剂用于内毒素检测。然而其重组表达困难，且对于环境中内毒素的控制要求极高。该文首先克隆了来源于东方鲎的全长C因子，并在N末端和C末端分别添加了Flag标签和6×His标签，同时用哺乳细胞表达载体中的分泌信号肽替换掉了原始C因子信号肽。构建好的重组质粒转染至人胚胎肾脏细胞Expi293F悬浮培养7 d后收获上清液，Western Blot检测蛋白与预测大小128 kDa一致，具有与内毒素结合以及结合后切割荧光底物的能力。该研究首次在人胚胎肾脏细胞Expi293F中成功表达出具有生物学活性的全长C因子，表达量达到19.18 mg/L,比DING在昆虫细胞SF9中的表达量提高了113%。该方法对于后续开发低成本内毒素检测试剂盒具有指导意义。
关键词：内毒素检测;;鲎C因子;;Expi293F;;重组表达;;脂质体转染
基金资助：国家重点研发计划(2018YFA0900804);; 国家轻工技术与工程一流学科自主课题(LITE2018-24)
