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作者：敖龙;朱玲玉;庞欣;辛瑜;郭忠鹏;朱瑞;李默影;顾正华;郭自涛;张梁;
单位：江南大学,粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心;江苏大学食品与生物工程学院;
摘要：为实现人源肿瘤抑素Tumstatin在大肠杆菌中的可溶性表达，构建了5种不同促溶性融合标签与tumstatin基因融合表达的重组大肠杆菌BL21(DE3),利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导重组菌进行摇瓶发酵，利用SDS-PAGE和Western-Blot分析并筛选出能可溶性表达Tumstatin蛋白的重组菌。构建的重组菌中BL21/pGEX-6p-1-Tum(含谷胱甘肽巯基转移酶标签—GST标签)、BL21/pET28a-MBP-Tum(含麦芽糖结合蛋白标签—MBP标签)、BL21/pET28a-Tum(无标签)都是以包涵体的形式表达融合蛋白Tumstatin,只有重组菌BL21/pET28a-XXA-Tum(含抗冻蛋白的反向蛋白—XXA标签)能以可溶性的形式表达融合蛋白且目的蛋白占菌体总蛋白45%以上。利用亲和层析对目的蛋白进行纯化并进行Western-Blot分析，得到分子质量为50.9 kDa的目的条带，与理论分子质量一致。进一步对重组菌BL21/pET28a-XXA-Tum的诱导剂添加浓度、诱导剂添加时间、诱导温度、诱导时间诱导条件进行优化。最终选择Tumstatin融合蛋白诱导条件为：诱导剂浓度0.1 mmol/L、2 h添加诱导剂、诱导温度16℃、诱导时间36 h。人源肿瘤抑素在大肠杆菌中可溶性表达为大量制备可溶性人源肿瘤抑素奠定了基础，可为功能性多肽在大肠杆菌中的可溶性表达提供借鉴。
关键词：人源肿瘤抑素;;大肠杆菌;;可溶性表达;;融合标签;;抗冻蛋白的反向蛋白
基金资助：国家重点研发计划(2021YFC2100300)
