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作者：刘海媛;刘颖达;Tuyatsetseg Jambal;吉日木图;伊丽;
单位：内蒙古农业大学,乳品生物技术与工程教育部重点实验室;中-蒙生物高分子应用研究联合实验室;蒙古国立科技大学轻工业学院;内蒙古中哈骆驼研究院;
摘要：纳米抗体(nanobody, Nb)具有稳定性高、特异性强、易于表达等优势，已经成为小分子免疫分析的重要工具。为了监测乳制品中黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1,AFM1)的污染情况，以先前从双峰驼AFM1免疫文库中淘选得到的抗AFM1型纳米抗体M6为研究对象，评估其理化性质并建立间接竞争酶联免疫吸附测定法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay, icELISA)。优化反应体系中封闭方法、甲醇溶液、pH值和离子强度等参数后，建立竞争抑制标准曲线，并进行方法学验证特异性和准确性。结果表明，Nb-M6具有良好的亲和力和热稳定性；Nb-icELISA的检测限(limit of detection, LOD)为0.111 ng/mL,半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC_(50))为1.498 ng/mL,乳制品加标回收率为89.8%～104.1%,与高效液相色谱法的检测结果趋于一致。该方法操作简单、便捷，可应用于乳制品中AFM1的初步批量筛查。
关键词：纳米抗体;;间接竞争酶联免疫吸附测定法;;黄曲霉毒素M1;;乳制品
基金资助：内蒙古农业大学食品科学与工程学院科技计划项目(SPKJ201913);; 内蒙古自治区自然科学基金(2020BS03011);; 国家重点研发计划项目(2020YFE0203300);; 内蒙古自治区科技成果转化专项资金项目(2021CG0021)
