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作者：刘海媛;刘颖达;李庆辉;刘佳;吉日木图;伊丽;
单位：内蒙古农业大学,乳品生物技术与工程教育部重点实验室;内蒙古中哈骆驼研究院;
摘要：黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1,AFM1)对人类和动物具有致癌性、诱变性、致畸性等，广泛存在于哺乳动物乳汁及其乳制品中。因此，制备特异性强、灵敏度高的抗体来检测AFM1至关重要。该研究以AFM1-BSA为抗原免疫双峰驼，采血分离淋巴细胞，提取总RNA反转录为cDNA,通过巢式PCR获得重链可变区(variable domain of heavy chain, VHH),与pComb3XSS载体连接电击转化至Escherichia coli TG1,构建AFM1特异性噬菌体展示文库。以AFM1-OVA为靶向抗原，使用4轮酸洗脱和竞争洗脱相结合的策略对文库进行淘选，并对抗AFM1纳米抗体进行初步鉴定，最后预测了精准的三维模型结构。结果显示，抗AFM1纳米抗体文库库容量为2.27×10~9 CFU,多样性丰富，插入率为100%。经淘选共获得6条独特序列的纳米抗体。其中VHH-M4和VHH-M6具有较高的灵敏度，初步测定半抑制浓度分别为0.415 ng/mL和1.877 ng/mL,线性范围分别为0.141～1.652 ng/mL和0.800～3.811 ng/mL。一级和二级结构结果显示VHH-M4和VHH-M6均为亲水性蛋白，框架区(framework region, FR)和互补决定区(complementarity determining region, CDR)区符合典型纳米抗体的结构特征。该研究为AFM1免疫学检测提供核心元件，并为探究AFM1与VHH的分子结合机制奠定基础。
关键词：黄曲霉毒素M1;;纳米抗体;;噬菌体文库;;结构预测
基金资助：内蒙古农业大学食品科学与工程学院科技计划项目(SPKJ201913);; 内蒙古自治区自然科学基金项目(2020BS03011);; 国家重点研发计划项目(2020YFE0203300)
