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作者：袁方;李国莹;顾秋亚;余晓斌;
单位：江南大学生物工程学院;江苏一鸣生物股份有限公司;
摘要：谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase, TGase)可以促进蛋白质分子内或分子间的交联，在食品、制药、纺织等行业中均有着广泛的应用。为了高效生产具有优良特性的TGase,该研究以茂源链霉菌(Streptomyces mobaraensis)来源的TGase为研究对象，比较了两个不同来源的TGase的性质，将具有较优酶学性质的TGase基因tg_(LD)分别采用6种不同质粒在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行异源表达。其中，重组菌E.coli BL21(DE3)(pET32a-tg_(LD))实现了成熟TGase的异源表达，添加0.2 mmol/L IPTG、25℃诱导8 h,重组TG_(LD)的酶活力为0.45 U/mL。为进一步提高TG_(LD)的表达量，构建了可以特异性激活pro-TGase的2种表达载体。其中，重组菌E.coli BL21(DE3)(pCOLDⅡ-pro-EK-tg_(LD)),添加0.2 mmol/L IPTG、15℃诱导24 h,体外活化后获得具有活性的TG_(LD)酶，其酶活力达25.23 U/mL。该研究实现了具有优良性质的活性TG_(LD)在E.coli中的高效表达。
关键词：谷氨酰胺转氨酶;;茂源链霉菌;;大肠杆菌;;高效表达
