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作者：白佳文;王亚森;杜祥坤;佀辰钰;兰周格;中西秀树;李子杰;
单位：江南大学生物工程学院;
摘要：基于酿酒酵母孢子表面展示系统，实现聚对苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene terephthalate, PET)水解酶FAST-PETase的孢子固定化。使用整合型质粒pRS306-TEF1pr-ss-FAST-PETase,将编码FAST-PETase的基因插入到酿酒酵母dit1Δ缺陷型菌株的基因组中，使蛋白更加稳定的表达。以双-2-(羟乙基)对苯二甲酸酯[bis(2-hydroxyethyl) terephthalate, BHET]为底物，对孢子固定化FAST-PETase的最适反应条件、热稳定性、pH耐受性、洗涤剂/有机试剂耐受性和重复使用能力进行研究。孢子固定化FAST-PETase的最适反应条件为50℃,pH 8.0。在30～80℃孵育12 h后，能保留82%以上的活性。同样地，在pH 5.0～9.0孵育12 h后，也能保持78%以上的活性。与游离酶相比，孢子固定化FAST-PETase对有机试剂也有一定的抗性，在重复使用7次后仍然保留初始活性的35%。该研究利用酿酒酵母孢子表面展示系统成功实现孢子固定化FAST-PETase,并将其应用于BHET的水解中，为PET塑料的长期降解提供了新的平台。
关键词：酿酒酵母;;孢子表面展示;;FAST-PETase;;BHET降解;;酶学性质
基金资助：国家自然科学基金项目(32171475)
