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作者：焦颖欣;郭立峥;宋程羽;宋智泉;冯会粉;迮晓雷;葛媛媛;姚粟;
单位：中国食品发酵工业研究院有限公司,中国工业微生物菌种保藏管理中心;汤臣倍健股份有限公司;
摘要：复合益生菌产品的活菌数是评估其质量和功效的关键参数。然而，如何在复合益生菌产品中实现特定菌种活菌数的精准检测是目前行业内面临的技术难题。叠氮溴化丙锭(propidium monoazide, PMA)结合荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)技术，可有效区分死活菌，精确检测多菌种体系中目标菌种的活菌数。该研究以副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)为研究对象，通过比较7种常用DNA提取方法的效率并优化PMA前处理条件，建立了基于PMA-qPCR的活菌定量检测方法，并对其特异性和适用性进行了验证。结果表明，采用珠式研磨仪破碎法一步式提取DNA时，其提取效率优于其他方法。当PMA浓度为50μmol/L,暗孵育5 min并曝光15 min时，此条件能够有效区分死活菌。该方法的定量限为8.07×10~3 CFU/mL。特异性和适用性验证结果表明，所建立的PMA-qPCR方法特异性较好，能够在复合益生菌产品中精确测定L.paracasei的活菌数，并能有效识别未标示添加量的样品中是否存在活性L.paracasei。该方法为复合益生菌产品的质量控制和行业标准化提供了可靠的技术支持，为益生菌产品的质量监管提供了新的技术选择。
关键词：副干酪乳酪杆菌;;活菌定量;;PMA-qPCR技术;;复合益生菌产品;;质量控制
基金资助：中国轻工集团有限公司科技创新基金项目(ZQ2023JC-QN04);; 中国食品发酵工业研究院有限公司强院工程项目
