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作者：贾煜浛;张想军;马铖;朱滕滕;魏晓博;陈龙;刘慧燕;方海田;
单位：宁夏大学食品科学与工程学院,宁夏食品微生物应用技术与安全控制重点实验室;宁夏三十六度生物科技有限公司;宁夏乙征生物工程有限公司;
摘要：青霉素酰化酶(penicillin acylase, PA)主要用于β-内酰胺类抗生素半合成工业生产。该文从雷氏普罗维登斯菌(Providencia rettgeri)获得pga基因，在毕赤酵母(Komagataella pastoris)GS115中进行异源表达，并对重组酶PA进行产酶条件优化。异源表达构建的结果表明，重组毕赤酵母发酵上清液酶活力为2 155.59 U/L,沉淀酶活力为1 375.75 U/L。重组酶的最佳诱导产酶条件为温度29℃,时间72 h,甲醇浓度1.5%,重组酶PA的活性为(5 003.72±50.623) U/L,酶活力较优化前提高了1.57倍，纯化后蛋白大小为72 kDa,蛋白浓度为1.58 mg/mL,纯化后重组酶的最适反应温度为60℃,最适pH值为7,Mn~(2+)对其有强烈抑制作用，Al~(3+)对其有强烈激活作用。该研究结果可为青霉素酰化酶的异源表达及进一步工业应用提供指导。
关键词：毕赤酵母;;青霉素酰化酶;;异源蛋白表达;;酶学性质;;高效表达
基金资助：宁夏回族自治区重点研发计划项目(2022BDE02004)
