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作者：蒋雨红;邱世骥;胡蝶;周培鹏;廖清;刘文宗;胡晓清;
单位：江南大学生物工程学院;广州华酵生物科技有限公司;
摘要：(-)-α-红没药醇[(-)-α-bisabolol, BO]具有抗炎、抗菌和改善皮肤的作用，在制药和化妆品等领域应用广泛，因此BO的微生物合成具有重要前景。目前在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、解脂耶氏酵母和酿酒酵母均有BO合成报道，其代谢工程改造策略包括：强化甲羟戊酸途径和β-氧化途径、提高乙酰辅酶A供给、弱化竞争途径等。基于此，该研究首次在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中合成BO,并评价了敲除Ku70(编码非同源末端连接的DNA修复)这一新策略对BO合成的影响。首先将MrBBs(编码BO合成酶)转化GS115,构建GS115/pPICZ A-MrBBs,添加正十二烷进行两相培养，132 h后BO合成量达到3.11 mg/L;然后利用pPpT4质粒敲除GS115的Ku70基因，获得GS115ΔKu70,并构建GS115ΔKu70/pPICZ A-MrBBs,培养132 h后，BO的产量相较GS115/pPICZ A-MrBBs增加了15.95倍，达到83.22 mg/L,显示Ku70基因缺失可显著提高BO合成。该研究显示P.pastoris具有合成BO的潜力，Ku70缺失可大幅提升BO合成水平，为进一步代谢工程改造奠定了坚实基础。
关键词：毕赤酵母;;(-)-α-红没药醇;;敲除;;Ku70;;MrBBs
基金资助：国家重点研发计划政府间国际科技创新合作项目(2023YFE0104400)
