来源：期刊VIP网 时间：
作者：王海英;陈志芳;朱甜甜;孙晶晶;王伟;郝建华;
单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所;大连海洋大学水产与生命学院;上海海洋大学食品学院;
摘要：褐藻胶通过生物降解法可制备低分子质量的褐藻寡糖，以克服褐藻胶生物利用度低的缺点，广泛应用于医疗、食品、化妆品等行业。该研究克隆表达了一株海洋弧菌Vibrio sp.L2中的褐藻胶裂解酶基因AlgL3199,并对其酶学性质和降解产物进行研究。以Vibrio sp.L2基因组为模板，克隆褐藻胶裂解酶基因，构建重组质粒pET-24a(+)/AlgL3199进行异源表达，经HisTrap~(TM) HP柱亲和层析纯化后进行酶学性质及降解产物的研究。结果表明，重组酶AlgL3199最适温度为40℃,在10～35℃下保温1 h可保留80%以上的活性；最适pH值为10,在pH 8～10孵育12 h可保留70%以上的活性；金属离子终浓度为1 mmol/L时，Cu~(2+)、Mn~(2+)、Co~(2+)对重组酶AlgL3199有明显促进作用，十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)及EDTA完全抑制酶的活性；NaCl终浓度为1.125 mol/L时对重组酶AlgL3199激活效应最强；根据底物特异性及薄层层析结果表明，重组酶AlgL3199酶解PolyM、PolyG及褐藻酸钠的主产物均为二糖至四糖，是一种具有G偏好性的内切型双功能酶。以上结果表明，AlgL3199已成功在大肠杆菌中实现了异源表达，在低温和弱碱性环境下比较稳定，是一种双功能褐藻胶裂解酶，这为褐藻胶的降解提供了一种新型工具酶，有利于褐藻工业生物技术的发展和应用。
关键词：褐藻胶裂解酶;;褐藻寡糖;;酶学性质;;异源表达
基金资助：国家重点研究发展计划项目(2022YFC2805101);; 山东省自然科学基金项目(ZR2022MD084);; 中国水产科学研究院基本科研业务费项目(2023TD71);; 青岛市市南区应用基础研究计划项目(2023-2-027-YY);; 黄海水产研究所基本科研业务费项目(20603022024003)
