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作者：余霞;杨雯钰;周昀;王水平;胡晓清;
单位：江南大学生物工程学院;广州悦荟化妆品有限公司;
摘要：阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)是重要的乳品致病菌，在世界范围污染频发，由于其具有较强的环境耐受性，挖掘针对C.sakazakii的新型抗菌剂具有重要意义。昆虫死亡素(thanatin, Tn)是一种极具潜力的靶向细胞外膜的抗菌肽，含有21个氨基酸并具有β-发夹结构。Tn对大肠杆菌具有较好杀菌作用，而对C.sakazakii作用尚无报道。基于此，该文对Tn进行异源表达，并首次研究了Tn对C.sakazakii的抗菌作用。利用毕赤酵母(Pichia pastoris),分别借助P_(AOX)和P_(GAP)对密码子优化后的Tn基因进行异源表达，分析Tn对C.sakazakii BAA894的抑菌效果，并通过比较BAA894及其脂多糖缺失株BAA894ΔwaaC的敏感性差异，探究其可能作用机制。结果显示，组成型P.pastoris GS115/pGAPZα A-than-1和诱导型GS115/pPICZα A-than-1均能有效表达活性Tn,合成量分别为24.34 mg/L和28.03 mg/L。Tn经His-tag亲和层析后，80 mg/L Tn对C.sakazakii BAA894生长抑制率达到98.49%,显示Tn对C.sakazakii具有较强杀菌作用，而对BAA894ΔwaaC生长抑制率为91.01%,较BAA894降低了7.48%,显示Tn的作用靶标与脂多糖的核心多糖和O-抗原有关。该研究为挖掘并改进C.sakazakii的新型抗菌剂奠定了重要基础。
关键词：昆虫死亡素;;抗菌肽;;阪崎肠杆菌;;巴斯德毕赤酵母;;脂多糖
基金资助：国家重点研发计划政府间国际科技创新合作项目(2023YFE0104400)
