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作者：郭子妍;毛文刚;林红;高文欣;王月峰;舒正玉;
单位：福建师范大学生命科学学院,工业微生物发酵技术国家地方联合工程研究中心;山东第二医科大学生命科学与技术学院,潍坊市呼吸道病原菌及药物治疗重点实验室;
摘要：微生物源甾醇酯酶资源的匮乏，制约了甾醇绿色加工技术的普及推广。Ophiostoma piceae胆固醇酯酶(Ophistoma picae steryl esterase, OPE)是到目前为止，第一个报道的真正微生物源胆固醇酯酶。实现OPE的工业化生产，将有效解决该技术瓶颈。为提高其在毕赤酵母中的表达水平，该研究分别考察了基因拷贝数、分泌信号类型和共表达二硫键异构酶对ope基因在P.pastoris中高效表达的影响。结果表明，上述3种因素均可在一定程度上提高重组OPE产量，其中共表达二硫键异构酶的作用最为显著。筛选到的最高表达量的重组P.pastoris菌株，其胞外OPE产量为(27.4±0.8) U/mL,较优化前提高了161.18倍。高效表达ope基因的重组P.pastoris菌株的构建与筛选，将为后续重组OPE的应用奠定基础。
关键词：Ophiostoma piceae胆固醇酯酶;;毕赤酵母;;基因多拷贝重组;;信号肽;;蛋白质二硫键异构酶;;异源高效表达
基金资助：国家自然科学基金项目(31370802,31870787);; 福建省自然科学基金项目(2017J01441,2021J01169)
