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作者：黄茜琳;黄俊宝;高旭丽;罗雅妮;陶伟;郭明雨;刘永圆;吴超;吴晶;刘艳;
单位：安徽工程大学生物与食品工程学院;
摘要：为提高纳豆激酶的表达量，在不改变编码纳豆激酶的氨基酸序列前提下，将aprN基因的N端编码序列(N-terminal coding sequences, NCSs)进行同义突变，构建包含突变序列的pHY-P43质粒，经转化和测序分别构建4株突变菌株NK1、NK2、NK3和NK4,纤维蛋白板检测纳豆激酶活力，利用SDS-PAGE验证，通过响应面优化发酵条件。结果表明，NK1、NK2、NK3、NK4菌株纳豆激酶活力分别为94.8、101.9、124.2、69.4 IU/mL。其中NK3菌株的酶活力最高，较原始菌株提高了50%;NK4菌株酶活力最低仅为原始菌株酶活力的83%。SDS-PAGE显示重组酶生产纳豆激酶的分子质量约为28 kDa,与理论的分子质量27 kDa相符。通过响应面分析得出优化后重组菌株NK3产纳豆激酶的最佳条件为：初始pH 7.56、发酵温度35℃、发酵时间38 h。纳豆激酶酶活力138.1 IU/mL,较未优化前提高11.2%。该研究为提高纳豆激酶活力提供一种新的策略，且不改变纳豆激酶本身的性质。
关键词：纳豆激酶;;aprN基因;;N端编码;;枯草芽孢杆菌;;同义突变
基金资助：国家自然科学基金项目(32372295);; 安徽省高校杰出青年科研项目(2023AH020013);; 安徽省大学生创新创业计划项目(202310363254)
