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作者：杜菲凡;黎菁菁;郑蓝昕;张迪;叶慧敏;邓俊威;秦煜南;黄秋燕;曹诗林;曾新安;
单位：佛山大学,广东省食品智能制造重点实验室;佛山大学食品科学与工程学院;
摘要：脂肪酶是一种生物催化剂，在多种生化反应中具有重要的作用。枯草芽孢杆菌脂肪酶A(Bacillus subtilis lipase A, Lip A)是目前分子质量最小的脂肪酶之一，由于其对底物的适应性强、耐碱性强、无盖子结构、不需要界面活化等优点，在食品、医药、造纸、洗涤剂等方面具有重要的应用前景。为提高LipA的发酵水平，该研究将Lip A表达于大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中，并构建生长期启动子ynhG的Lip A表达菌株，通过上调ynhG启动子在生长期的表达来增加Lip A的表达量。以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)表征，在ynhG启动子的-10区、-35区和RBS等区域进行饱和突变，以获得启动强度提高的增强型ynhG启动子的序列。根据所获得的增强型ynhG启动子序列，通过定点突变构建增强型的ynhG-Lip A-BL21(DE3)表达菌株后进行表达鉴定，结果表明，所获得的增强型ynhG启动子的酶活产量比野生型的ynhG启动子增加了31%～137%。研究成果将为提升枯草芽孢杆菌脂肪酶在工业领域的应用提供重要的基础数据。
关键词：枯草芽孢杆菌脂肪酶A;;大肠杆菌;;生长期启动子;;载体构建;;发酵优化
基金资助：国家重点研发计划项目(2023YFD2101003)
