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作者：陈富春;徐奔;沈维军;刘磊;万发春;程安玮;
单位：湖南农业大学食品科学技术学院;湖南农业大学动物科学技术学院;湖南农业大学动物医学院;
摘要：为探究花旗松素(taxifolin, TAX)对棕榈酸钠(ammonium palmitate, PA)诱导的HepG细胞脂代谢的影响及其调节作用机制。该文通过CCK8法筛选合适的建模浓度以及TAX安全添加浓度，用油红O染色进一步验证构建模型。同时测定甘油三酯(triglyceride, TG)以及活性氧(reactive oxygen species, ROS)的含量，利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR, RT-qPCR)技术检测A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase, ACC)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(stearoyl-CoA desaturase, SCD)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein α, C/EBP-α)、甾醇调节元件结合蛋白1C(sterol regulatory element binding protein 1C, SREBP-1C)、氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor α, PPARα)的基因表达。利用蛋白免疫印迹(Western blot, WB)测定脂肪酸合酶(fatty acid synthase, FAS)、白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36, CD36)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase, AMPK)以及PPARα的蛋白表达，并用免疫荧光测定FAS以及PPARα的蛋白表达水平。使用小干扰RNA(small interfering RNA, si RNA)对PPARα进行沉默处理，进一步验证TAX对脂代谢的调控机制。结果150μmol/L的TAX降低了PA处理HepG2细胞中TG的水平(P<0.01),各个浓度的TAX处理均使得ROS的含量显著下降(P<0.01)。150μmol/L浓度时显著下调了ACC、SCD、C/EBP-α、SREBP-1C的表达，上调了PPARα的mRNA表达(P<0.01)。所有浓度均可以显著上调PPARα的蛋白表达以及AMPK的磷酸化水平(P<0.05),显著下调FAS以及CD36的蛋白表达(P<0.01)。所有浓度的TAX均能显著上调PPARα,下调FAS的免疫荧光强度(P<0.01)。si RNA PPARα抑制了TAX的保护作用。上述结果表明，TAX能够介导PPARα信号通路调节脂质积累，改善PA引起的HepG2细胞脂代谢紊乱。
关键词：花旗松素;;脂代谢;;信号通路;;基因沉默;;HepG2细胞
基金资助：国家重点研发计划项目(2022YFD1301101-1)
