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作者：谷欣悦;赵奎;李蕊兵;张依婷;胡凯弟;李建龙;赵宁;李琴;刘书亮;
单位：四川农业大学食品学院;
摘要：拟除虫菊酯类农药经由酯酶催化的酯键断裂是解毒的关键步骤，该酶的克隆表达可为工业化生产及酶学特性研究提供材料。该研究将源于枯草芽孢杆菌J6的氯氰菊酯降解酯酶基因est13克隆至载体pESC-HIS上，再转化至食品级宿主菌酿酒酵母INVSc1中，通过缺陷型固体培养基SD-HIS筛选阳性转化子。提取重组酯酶Est13对10 mg/L的氯氰菊酯进行降解反应，确定该酶最适反应温度为25℃,最适反应时间为2 h。采用单因素和响应面试验进一步优化其诱导表达条件。结果表明，在葡萄糖添加量0.5%(体积分数),装液量18%(体积分数),转速220 r/min,接种量1%(体积分数),OD_(600)值为0.4,诱导温度30℃,半乳糖添加量2%(体积分数),诱导时间14 h时，酿酒酵母基因工程菌INVSc1-pESC-HIS-Est13产重组酯酶Est13的相对酶活力提高为123.145%,酶活力提高为21.34 IU/mL,较大肠杆菌表达酶活力1.32 IU/mL有较大提升。适冷性氯氰菊酯降解酯酶Est13在酿酒酵母中成功表达且酶活力显著提高，为农产品农药残留的安全高效减除提供了参考价值。
关键词：拟除虫菊酯类农药;;降解;;酯酶;;酿酒酵母;;诱导表达优化
基金资助：四川省科技厅自然科学基金重点项目(2023NSFSC0182);; 国家自然科学基金面上项目(31871770)
