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作者：孙慕娇;鞠建松;刘君;魏亮;
单位：河北师范大学生命科学学院;中国科学院天津工业生物技术研究所;
摘要：L-丝氨酸是一种重要的非必需氨基酸，具有重要的生理功能，在食品、化妆品和医药等领域具有广泛的应用。微生物发酵法具有环境友好，条件温和，底物可再生等优势，是生产L-丝氨酸的理想方法，受到研究者的广泛关注。在L-丝氨酸工程菌种的选育和改造过程中，需要对大量的菌种进行评估，存在大量的L-丝氨酸分析和检测工作，但是目前L-丝氨酸检测方法存在灵敏度差、准确度低、步骤繁琐等问题，严重限制了L-丝氨酸样品的高通量快速评估和检测。针对上述问题，该研究利用L-丝氨酸-3-脱氢酶的催化特性，建立了一种简单快速、特异性高的L-丝氨酸检测方法。通过对L-丝氨酸-3-脱氢酶挖掘和酶学性质分析，建立了L-丝氨酸最佳的酶法检测体系，该体系包括50 mmol/L碳酸钠-碳酸氢钠(pH=9.5),3 mmol/L NADP~+,来源于蚕豆农杆菌(Agrobacterium fabrum)的丝氨酸脱氢酶(L-serine dehydrogenase, SerDH)2 U/mL,检测温度为40℃。该研究建立的L-丝氨酸酶法检测方法具有简单快速、检测效率高等特点，在1～10 mmol/L L-丝氨酸的浓度范围具有良好的线性关系，R~2达到0.996 5。该研究建立的L-丝氨酸酶法检测方法能够实现L-丝氨酸样品的高通量检测和评估，为L-丝氨酸工业菌种的高通量选育提供了重要的技术支撑。
关键词：L-丝氨酸;;L-丝氨酸-3-脱氢酶;;酶学性质分析;;高通量检测方法
基金资助：天津市合成生物技术创新能力提升行动项目(TSBICIP-KJGG-026)
