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作者：张敬鑫;汤嘉宁;韩冰妍;王毅佳;张思琪;池林叶;王洁;韩爱云;邓蕊;李亚楠;陈永民;
单位：石家庄学院农业与食品科学系;石家庄市食品工程技术创新中心;唐山市市场监管综合执法局;
摘要：为开发一种可视化、特异性好、灵敏度高的检测食品中大肠埃希氏菌(Escherichia coli)O157:H7的方法，该研究选择Escherichia coli O157:H7的rfbE基因作为目的序列，针对目的序列设计环状探针和捕获探针，当环状探针与目的序列完全互补杂交，在DNA连接酶的作用下环化连接，捕获探针作为引物在Phi29 DNA聚合酶的作用下引发滚环扩增产生长的单链DNA,SYBR GreenⅡ结合单链DNA后荧光信号显著增强，其荧光强度与单链DNA的数量相关，结合实时定量荧光变化可以实现实验室的实时定量信号监测，也可在检测现场在紫外灯的照射下实现定性的信号可视化输出。结果显示，该方法具有实时定量输出模式下较宽的分析范围，线性范围5×10~(-3)～5×10~(-1) ng/μL微生物基因组DNA;具有高的灵敏度，现场可视化模式/实验室荧光实时定量PCR输出模式最低检测限分别为7.5×10~(-3)ng/μL和5.048×10~(-3)ng/μL微生物基因组DNA;该方法可实现不与非O157:H7大肠埃希氏菌同属间和种属间的交叉反应，特异性良好。该检测方法对人工污染食品样品进行检测，验证了其潜在应用价值。该双模态检测技术在食品中大肠埃希氏菌O157:H7的检测方面具有良好的实用性和明显的优势。
关键词：滚环扩增;;大肠埃希氏菌E.coli O157:H7;;双模态信号输出生物传感器;;实时荧光;;可视化
基金资助：石家庄学院大学生创新训练计划项目(2SCXM0221)
